Activated platelets in central venous catheters: a flow cytometry and numerical simulation approach

The central venous catheter that is inserted in patients undergoing hemodialysis can cause hemodynamic instability and trigger complications such as thrombus formation. The objective of this study was to investigate hemostatic and numerical influences on thrombus formation in patients undergoing hemodialysis with a central venous catheter. Participants were assigned to three groups: I: clinical and laboratorial healthy individuals matched by sex and age (controls); II: participants after one month of insertion of the catheter and III: participants after 4 months of insertion of the catheter. Platelet activation was investigated by GPIIb/IIIa and p-selectin expressions using flow cytometry. A three-dimensional model of the catheter was constructed in the numerical simulation for the calculation of partial differential equation of a platelet activation model. A significant difference was detected by the expression of p-selectin comparing the group I (33.42 ± 4.74), group II (40.79 ± 5.54) and group III(51.00 ± 7.21) (p < 0.0001). The median values for GPIIb/IIIa were 10426 (10029-10721), 13921 (13412-15652) and 19946 (18714-21815) after catheter insertion (p < 0.0001), for groups I, II and III, respectively. Excluding the first arterial orifice, venous orifices tend to have greater platelet activation when compared to the other arterial orifices. The results of this study showed the influence of arterial and venous lateral orifices in stimulating the development of thrombi associated with the activation of platelet markers the longer the catheter was used.

Milk-clotting proteases from Pleurotus albidus: an innovative alternative for the production of Minas frescal cheese

Pleurotus albidus, a naturally growing species in the Amazon region, has been considered a promising source of milk-clotting proteases. The production of such enzymes using lignocellulosic residues is a sustainable alternative to replace mammalian rennet. The application of P. albidus milk-clotting proteases in cheese making has not yet been reported in the scientific literature. The aim of this study was to characterize the milk-clotting proteases of P. albidus and use these enzymes in the production of Minas frescal cheese. For the production of coagulating proteases, the mushroom was grown in açaí seeds supplemented with rice bran (10%, w/w). The parameters affecting the production of coagulant, such as inoculum size, fermentation time, initial pH of cultivation medium and age of the inoculum were evaluated. The coagulant extract obtained under optimal production conditions was evaluated for optimal pH and temperature, pH and temperature stability, effect of ions and inhibitors. Significant production of coagulating proteases was obtained under the following conditions: inoculum size (2.5%), fermentation time (10 days), initial pH of the cultivation medium (6), and inoculum age (10 days). The coagulant exhibited significant catalytic activity in pH 5.0 at 55°C, with stability at 45°C and was completely inhibited by iodoacetic acid. The milk-clotting proteases of P. albidus were efficient for making Minas frescal cheese that presented 55.0% of moisture, 20.0% of lipids and 17.20% of protein. Pleurotus albidus is a potential source of milk-clotting proteases that can be applied in dairy industry for production of fresh Minas frescal cheese.

Application of an Enzymatic Extract from Aspergillus niger as Coagulant for Cheddar Cheese Manufacture

Abstract The coagulation of milk by a serin protease from Aspergillus niger NRRL3 was studied by rheology. Cheddar-type cheese was manufactured using 3.5% (v/v) of fungal enzymatic extract and fermentation-produced chymosin was used as control coagulant. Full composition and ripening of both kinds of Cheddar cheese were studied. Differences in the proteolysis of caseins, not only during cheese manufacture but also during ripening, affected cheese composition, texture and peptide profile. Microbial development during ripening was not affected by the coagulant used.

Anticoagulantes orales directos y un cambio en el paradigma del monitoreo de la anticoagulación / New direct oral anticoagulants, a paradigm shift in haemostasis assays / Anticoagulantes orais diretos e uma mudança no paradigma da monitorização da anticoagulação

Los nuevos anticoagulantes orales directos (DOACs) son agentes sintéticos dirigidos en forma específica contra el factor Xa o contra la trombina. Por su farmacocinética predecible y escasa variabilidad interindividual no es necesario el monitoreo de anticoagulación. Esto es un cambio en el paradigma del tratamiento anticoagulante. Sin embargo, los DOACs alteran las pruebas de hemostasia y es importante saber cómo interpretarlas en caso de hemorragia, episodio trombótico o ante una cirugía de urgencia. Las pruebas clásicas de coagulación solo sirven para orientar sobre el efecto anticoagulante de los DOACs. Se debe conocer, para cada agente, cuál de las pruebas es útil, el reactivo que se utilizó y el tiempo transcurrido desde la ingesta del medicamento. Las pruebas específicas miden la concentración del DOAC. Son más sensibles, pero no han sido investigadas en relación a eventos clínicos y poseen una gran variación interindividual. Se concluye que hasta ahora no se cuenta con pruebas validadas para definir si se debe ajustar la dosis de los DOACs, aún en pacientes con alto riesgo hemorrágico. Nuevos estudios clínicos que utilizan diferentes pruebas de hemostasia serán de utilidad para ayudar a interpretar el efecto de los DOACs. Hasta que esto suceda, se tendrá que convivir con este nuevo paradigma, la ausencia del monitoreo.

New oral direct anticoagulants (DOACs) are synthetic agents targeting either thrombin or factor Xa. Their predictable pharmacokinetics and scarce variability eliminate the need for regular coagulation monitoring. This is a paradigm shift in anticoagulation treatment. However, DOACs interfere with coagulation assays and it is very important to recognize them in a bleeding or thrombotic event or in an urgent surgery. Commonly used screening coagulation tests are of limited utility and different test reagents, what kind of test to perform for each anticoagulant and the time of drug intake must be considered. Specific assays can accurately quantify drug levels, but they are not yet related to clinical events and there is great inter-individual variability. As a conclusion,there are no laboratory assays developed to support dose adjustment based on these test results. New clinical trials with laboratory measurement will help solve this. Until then, this new paradigm of no laboratory testing in routine clinical practice will have to be accepted.

Os novos anticoagulantes orais diretos (DOACs) são agentes sintéticos dirigidos em forma específica contra o fator Xa ou contra a trombina. Devido a sua farmacocinética previsível e escassa variabilidade interindividual não é necessária a monitoração de anticoagulação. Essa é uma mudança no paradigma do tratamento anticoagulante. Entretanto, os DOACs alteram as provas de hemostasia e é importante saber de que maneira interpretá-las em caso de hemorragia, episódio trombótico ou diante de uma cirurgia de urgência. Os testes clássicos de coagulação apenas servem para orientar a respeito do efeito anticoagulante dos DOACs. É necessário conhecer, para cada agente, qual dos testes é útil, o reagente que foi utilizado e o tempo decorrido desde a ingestão do medicamento. Os testes específicos medem a concentração do DOAC. São mais sensíveis, mas não foram pesquisados em relação a eventos clínicos e possuem grande variação interindividual. A conclusão é que até o momento não se conta com provas validadas para definir se deve ser ajustada a dosagem dos DOACs, mesmo em pacientes com alto risco hemorrágico. Novos estudos clínicos utilizando diferentes testes de hemostasia serão de utilidade para ajudar-nos a interpretar o efeito dos DOACs. Até que isto aconteça, será preciso conviver com este novo paradigma, a ausência da monitorização.

Secreted fungal aspartic proteases: a review / Aspartil-proteasas secretadas por hongos: revisión

The aspartic proteases, also called aspartyl and aspartate proteases or acid proteases (E.C.3.4.23), belong to the endopeptidase family and are characterized by the conserved sequence Asp-Gly-Thr at the active site. These enzymes are found in a wide variety of microorganisms in which they perform important functions related to nutrition and pathogenesis. In addition, their high activity and stability at acid pH make them attractive for industrial application in the food industry; specifically, they are used as milk-coagulating agents in cheese production or serve to improve the taste of some foods. This review presents an analysis of the characteristics and properties of secreted microbial aspartic proteases and their potential for commercial application (AU)

Las aspartil-proteasas, también denominadas aspartato-proteasas o proteasas ácidas (E.C.3.4.23), pertenecen a la familia de las endopeptidasas, que se caracterizan por una secuencia conservada de Asp-Gly-Thr en su sitio activo. Estas enzimas se encuentran distribuidas en una amplia variedad de microorganismos, donde desempeñan funciones importantes en la nutrición y la patogenia, además de poseer otras características, como alta actividad catalítica y estabilidad en pH ácido, lo que las vuelve atractivas para su uso en industrias como la alimentaria, específicamente en la industria láctea, como agentes coagulantes para la elaboración de quesos o para mejorar el sabor de ciertos alimentos. En la presente revisión se lleva a cabo un análisis de las características y propiedades de las aspartil-proteasas secretadas por hongos y su potencial para aplicaciones comerciales (AU)

Efecto sobre el sistema de la coagulación del zumo de frutas y hortalizas peruanas / Effect on the clotting system of Peruvian fruit and vegetable juice

OBJETIVO: Comprobar el efecto anticoagulante in vitro e in vivo de frutas y hortalizas peruanas e identificar la vía de la coagulación sobre la que actúa. MATERIAL Y MÉTODOS: Se extrajo los zumos de Ananascomosus (L.) Merr, Citrus limonun Risso, Carica papaya L., Alliumsativum L., Allium cepa L. y Zingiber officinale L. Roscoe. Se realizó un estudio in vitro con plasma humano e in vivo administrando el zumo vía oral a ratas por catorce días. La actividad anticoagulante fue evaluada midiendo el tiempo de protrombina (TP) y el tiempo de tromboplastina parcial activado (TTPa), además se determinó el fibrinógeno. RESULTADOS: In vitro los zumos de Ananas y Zingiber prolongaron el TP, Carica el TTPa y los de Citrus, Alliumsativumy cepa ambas pruebas. In vivo los zumos de Allium cepa y Carica prolongaron el TP, Citrus el TTPa, Ananas ambas pruebas. Los zumos de Ananas, Citrus, Allium sativum y Zingiber disminuyeron el fibrinógeno. CONCLUSIÓN: In vitro e in vivo los zumos de Ananascomosus, Citrus limonun, Carica papaya y Allium cepa tienen efecto anticoagulante. Los zumos de Allium sativum y Zingiber officinale,tienen este efecto solo in vitro.

OBJECTIVE: Verify the anticoagulant effect in vitro and in vivo of Peruvian fruit and vegetable juice and identify the coagulation pathway on which it acts. MATERIAL AND METHODS: Extracted juices of Ananascomosus (L.) Merr, Citrus limonunRisso, Carica papaya L., Allium sativum L., Allium cepa L. and Zingiber officinale L. Roscoe. An in vitro study with human plasma and in vivo administering juice orally to rats for 14 days. Anticoagulant activity was evaluated by measuring the prothrombin time (PT) and partial activated thromboplastin time (APTT), the Fibrinogen was also determined. RESULTS: In vitro juices of Ananas and Zingiber prolonged PT, Carica prolonged APTT and Citrus, Allium sativum and cepa prolonged both tests. In vivo, juices of Allium cepa and Carica prolonged PT, citrus prolonged APTT, and Anannas both tests. The juices of Anannas, Citrus, Allium sativum and Zingiber decreased Fibrinogen. CONCLUSION: In vitro and in vivo Ananascomosus, Citrus limonun, Carica papaya and Allium cepa juices have anticoagulant effect. The juices of Allium sativum and Zingiber officinale, have this effect only in vitro.

VEGF and TSP1 levels correlate with prognosis in advanced non-small cell lung cancer

PURPOSE: There is a need for biomarkers that may help in selecting the most effective anticancer treatments for each patient. We have investigated the prognostic value of a set of angiogenesis, inflammation and coagulation markers in patients treated for advanced non-small cell lung cancer. PATIENTS AND METHODS: Peripheral blood samples were obtained from 60 patients before first line platinum-based chemotherapy ± bevacizumab, and after the third cycle of treatment. Blood samples from 60 healthy volunteers were also obtained as controls. Angiogenesis, inflammation and coagulation markers vascular endothelial growth factor (VEGF), their soluble receptors 1 (VEGFR1) and 2 (VEGFR2), thrombospondin-1 (TSP-1), interleukin-6 (IL6), sialic acid (SA) and tissue factor (TF) were quantified by ELISA. RESULTS: Except for TSP-1, pre- and post-treatment levels of all markers were higher in patients than in controls (p < 0.05). There was a positive and significant correlation between VEGF and VEGFR2 before treatment. VEGF also correlated with inflammatory markers IL-6 and SA. Moreover, there was a positive and significant correlation between levels of VEGFR1 and TF. Decreased levels of TSP-1 and increased levels of VEGF were associated with shorter survival. Bevacizumab significantly modified angiogenesis parameters and caused a decrease of VEGF and an increase of TSP-1. CONCLUSION: Angiogenesis, inflammation and coagulation markers were increased in NSCLC patients. Increased levels of VEGF and low levels of TSP-1 correlated with a poor prognosis (AU)

Empleo de coagulantes vegetales en leche de cabra murciano-granadina / Use of vegetable coagulants in Murciano-Granadina goat milk

El uso de coagulantes alternativos en la fabricación del queso favorece la obtención de productos con diferentes características a los que habitualmente encontramos en el mercado. Los coagulantes vegetales más utilizados en la actualidad son los derivados de Cynara Cardunculus, ya que permiten la elaboración de variedades de quesos con características organolépticas diferentes, que son ampliamente aceptadas por consumidores. En este trabajo se ha comparado la actividad coagulante de dos extractos vegetales de la flor de cardo (cardo silvestre: Cynara cardunculus subsp. flavescens y cardo cultivado: Cynara cardunculus subsp. cardunculus) comparándolos con coagulantes de origen animal y microbiano en leche de cabra Murciano-Granadina. Para ello se han utilizado dos métodos que definen el tiempo de coagulación: determinación visual de la aparición de los primeros flóculos (Método de Berridge) y la aplicación de sensores ópticos (CoAguLabTM). No se observan diferencias significativas en el perfil de reflectancia difusa, obtenido por el sensor CoAguLabTM entre los coagulantes vegetales y microbianos, pero si entre estos y los de origen animal con un 80% de quimosina. Los resultados obtenidos demuestran la existencia de una correlación lineal entre ambos métodos, por lo que el sensor óptico podría ser una alternativa al método de Berridge(AU)

The uses of alternative coagulants in cheese manufacture increase the products variability usually found in the market. Most of the vegetable coagulants used today are derived from Cynara cardunculus which allow the development of cheeses with different sensory characteristics. In this study, the clotting activity of two vegetable coagulants (wild cardoon: Cynara cardunculus subsp. flavescens and cultivated cardoon: Cynara cardunculus subsp. cardunculus) was compared with animal rennet and microbial coagulant in Murciano-Granadina goat milk. Two different procedures have been applied: Berridge method and optic sensor (CoAguLabTM). The corresponding means of vegetable, animal and microbial coagulant reflectance profiles obtained by CoAguLabTM were compared and no differences were found between vegetal and microbial coagulants, while differences were found between these and animal rennet (80% chymosin). Monitoring results showed the existence of a linear relationship between both methods, so that the optical sensor could be an alternative for Berridge method(AU)

Factores ligados a angiogénesis, coagulación y fibrinólisis en el pronóstico de pacientes con cáncer colorrectal / Clotting, fibrinolysis and angiogénesis linked factors in the prognosis of colorectal carcinoma patients

Las plaquetas implicadas en la angiogénesis tumoral secretan factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF). Los niveles de inhibidor del activador de plasminógeno tipo 1 (PAI-1) podrían regular la degradación de la matriz extracelular durante la angiogénesis. Durante este proceso tiene lugar la activación del sistema de la coagulación-fibrinólisis, que representa un evento clínico desfavorable. El factor de Von Willebrand (vWf), el dímero D (DD) y el fibrinógeno son marcadores sensibles de estos procesos. El recuento de plaquetas y los niveles de VEGF, PAI-1, vWf, DD y fibrinógeno podrían predecir la evolución clínica en pacientes con cáncer. En este estudio correlacionamos los niveles de VEGF, PAI-1, vWf, DD y fibrinógeno en pacientes con carcinoma colorrectal (CCR) en estadios I a IV sometidos a cirugía, a quimioterapia o a ambos métodos, con el análisis patológico/inmunohistoquímico en pacientes en estadios I-III y con la respuesta al tratamiento, y el riesgo de muerte en pacientes en estadio IV. Treinta y dos pacientes con CCR localizado o localmente avanzado y 32 con CCR metastático fueron evaluados. Las muestras sanguíneas se extrajeron antes de la cirugía y antes y después de la quimioterapia basada en fluoropirimidinas. Los enfermos en estadio IV recibieron una mediana de 3 ciclos de quimioterapia, entre muestras. En los pacientes en estadio I a III, los niveles basales de VEGF, recuento de plaquetas, fibrinógeno y PAI-1 se correlacionaron con el estadio tumoral. Además, la expresión tumoral de p21 y c-myc se asoció con niveles más elevados de vWf e inferiores de DD, respectivamente. En tumores metastásicos, los niveles prequimioterapia y posquimioterapia de VEGF, PAI-1 y CA19.9 se encontraron relacionados con las tasas de progresión.

Polución aérea y estado protrombótico / Air pollution and prothrombotic state

La polución aérea es una mezcla heterogénea de gases, líquidos y material particulado (MP) presente en el mundo urbano moderno. El MP varía en tamaño, desde pocos nanómetros hasta 10 micras de diámetro. Se ha observado que la exposición a MP se asocia a un mayor riesgo de enfermedades cardiovasculares. Al respecto se ha planteado tres posibles mecanismos: inducción de inflamación sistémica y/o estrés oxidativo; alteraciones en el balance de autonomía cardiaca; y, acción directa sobre el sistema circulatorio, causando vasoconstricción aguda, disfunción endotelial y estado protrombótico. Hay evidencias que indican que la polución aérea se asocia con el acortamiento del tiempo de protrombina, disminución del activador del plasminógeno tisular, aumento de fibrinógeno, factor VIII y factor von Willebrand e hiperactividad plaquetaria.

Air pollution is a heterogenic mixture of gases, liquids and particulate matter (PM) present in the urban modern world. PM rates vary in size from a few nanometers to 10 micra diameter. The exposure to PM is associated to a majorrisk of cardiovascular diseases as explained by three mechanisms: induction of systemic inflammation and/or oxidative stress, alteration in the cardiac autonomic balance and direct action on the circulatory system, causing acute vasoconstriction, endothelial dysfunction and prothrombotic state. There is evidence suggesting that air pollution is associated with shortened prothrombine time, decrease in tissue plasminogen activator, increase of fibrinogen, factor VIII and factor von Willebrand, and platelet hyperactivity.

Inflamación II: mediadores químicos / Inflammation II: Chemical mediators

Los diferentes mediadores químicos presentes en el proceso inflamatorio han sido discutidos en forma separada, pero la realidad es que ellos están íntimamente interrelacionados. Un ejemplo de esto es el papel del factor de Hageman activado que actúa al mismo tiempo sobre el sistema de cininas, de coagulación y el fibrinolítico; lo mismo se puede observar de la síntesis y acción de la citocinas que en algunos casos actúan sinergísticamente y presentan acciones en diferentes células blanco. También es necesario entender que existen mecanismos inactivantes de los diferentes mediadores químicos, los cuales limitan la respuesta inflamatoria. Estos mecanismos en algunos casos son bien entendidos (histaminal), y en otros no han sido dilucidados. Como síntesis, podemos enumerar las siguientes tres acciones principales de los mediadores químicos: 1. Aumento en la permeabilidad vascular: Histamina, anafilatoxinas C3a y C5a, cininas y TAF. 2. Quimiotaxis: Fragmentos del complemento C5a, Leucotrieno B4, PAF y productos bacterianos. 3. Fiebre: IL-1 y TNF, Prostaglandinas. 4. Dolor: Prostaglandinas y Bradicinina. La discusión acerca de los mediadores químicos completa la descripción general sobre el proceso inflamatorio, Aun cuando los cambios hemodinámicos, la permeabilidad y el concurso de los leucocitos han sido descritos secuencialmente, se debe tener en cuenta que como respuesta a los agentes desencadenantes el proceso de la inflamación es concurrente, en donde todos los sistemas se disparan simultáneamente con el fin de controlar el daño local ocasionado a tejidos vascularizados.